CLONACIÓN Y BIOLOGÍA SINTÉTICA

QUE ES LA CLONACIÓN

La clonación molecular se refiere al proceso mediante el cual se producen moléculas de ADN recombinante y se transforman en un organismo huésped, donde se replican. Una reacción de clonación molecular se compone típicamente de los siguientes componentes:

El fragmento de ADN de interés a ser replicado

Un vector plásmidico que contiene todos los componentes para la replicación en el host

El ADN de interés, tal como un gen, un elemento o elementos reguladores, o un operón, etc., se prepara para la clonación extrayéndola del ADN fuente usando enzimas de restricción, copiándola usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o ensamblando a partir de oligonucleótidos individuales.

Al mismo tiempo, se prepara un vector plasmídico en forma lineal usando enzimas de restricción o PCR.

El plásmido es una pequeña pieza circular de ADN que se repite dentro del huésped, y existe por separado del ADN cromosómico o genómico del huésped. Mediante la unión física del ADN de interés al vector plasmídico a través de enlaces fosfodiéster, el ADN de interés se convierte en parte del nuevo plásmido recombinante y es replicado por el huésped.

Los vectores plasmídicos permiten copiar el ADN de interés en grandes cantidades y, a menudo, proporcionan los elementos de control necesarios para ser utilizados para dirigir la transcripción y traducción del ADN clonado. Como tal, se han convertido en el caballo de batalla para muchos métodos moleculares, como la expresión de proteínas, estudios de expresión génica y análisis funcional de biomoléculas.

Proceso

Clonación y biología sintética

Durante el proceso de clonación, los extremos del ADN de interés y el vector han de ser modificados para hacerlos compatibles para unirse a través de la acción de una ADN ligasa, recombinasa o mecanismo de reparación de ADN in vivo. Estas etapas utilizan típicamente enzimas, tales como nucleasas, fosfatasas, quinasas y / o ligasas. Se han desarrollado muchas metodologías de clonación y, más recientemente, kits para simplificar y estandarizar estos procesos.

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